GE_AKTA Pilot蛋白純化儀廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)研究應(yīng)用領(lǐng)域,是重要的操作技術(shù)。典型的真核細(xì)胞含有數(shù)千種不同的蛋白質(zhì),有些很豐富,有些只包含幾個(gè)拷貝。要研究某種蛋白質(zhì),必須先從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出該蛋白質(zhì)。
蛋白純化儀利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來使分離的目的達(dá)到蛋白質(zhì)的選擇吸附分離。蛋白純化儀采用低溫有機(jī)溶劑沉淀法,使用如甲醇,乙醇等與水可混溶的有機(jī)溶劑,降低多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度并且將其析出,和鹽析相比較,這種方法的分辨率更加的高,然而蛋白質(zhì)比較容易變形,需要在低溫下進(jìn)行。
蛋白純化儀還吸取按照分子大小不一樣的方法,在介質(zhì)中對蛋白質(zhì)離心時(shí),蛋白質(zhì)沉降速度取決于它的質(zhì)量和密度,質(zhì)量和密度越大,那么沉降越快;凝膠過濾(一種柱層析);超過濾(利用蛋白質(zhì)分子不能從半透膜通過的性質(zhì))。
GE_AKTA Pilot蛋白純化儀使用注意事項(xiàng):
1.為了避免蛋白質(zhì)變性,不要對樣品劇烈攪動(dòng)和反復(fù)凍融。
2.緩沖溶液成分盡量模擬細(xì)胞內(nèi)環(huán)。
3.在純化分離過程中,均必須時(shí)刻對它的穩(wěn)定性注意維護(hù),使它的活性得到保護(hù),要注意避免蛋白質(zhì)的氧化,避免重金屬對目標(biāo)蛋白的破壞,避免微生物生長,避免蛋白酶對目標(biāo)蛋白的降解。
4.盡可能置于冰上或者在冷庫內(nèi)進(jìn)行操作。
5.蛋白濃度不要太稀。
6.GE_AKTA Pilot蛋白純化儀除非是進(jìn)行聚焦層,否則需要合適的pH環(huán)境,防止所使用的緩沖溶液pH與pI相同,使蛋白質(zhì)的沉淀得以避免。